アルカリプロテアーゼ活性の検出方法は？
アルカリプロテアーゼ活性の検出方法は？
酵素活性は、特定の化学反応を触媒する酵素の能力を指します。酵素活性のサイズは、対応する条件下で触媒する特定の化学反応の速度で表すことができます。遼寧アルカリプロテアーゼ酵素の活性を測定することは、実際には酵素によって触媒される化学反応の速度を測定することです。酵素反応の速度は、反応基質の減少または単位時間あたりの生成物の増加によって表すことができます。感度のために、通常、単位時間あたりに生成される製品の量が測定されます。酵素反応の速度は時間の経過とともにその増加値を徐々に低下させる可能性があるため、酵素活性を正しく測定するためには、酵素反応の初速度を決定する必要があります。
アルカリプロテアーゼ活性測定の原理フォリン法の原理
アルカリプロテアーゼは、アルカリ条件下でカゼインのチロシンへの加水分解を触媒することができます。チロシンは、フェノール性水酸基を含むアミノ酸であり、フォリン（リンタングステン酸とリンモリブデン酸の混合物）と反応できます。（フォリンフェノール反応：フォリン試薬はアルカリ性条件下で非常に不安定であり、フェノール化合物によって定量的に還元されてタングステンブルーとモリブデンブルーの混合物を生成し、異なる青の色合いを示すのは簡単です。）比色分析の使用つまり、生成されたチロシンの量を決定することができ、Liaoningアルカリプロテアーゼによる単位時間内のカゼインの加水分解によって生成されたチロシンの量は、酵素活性を表すために使用され、それによって酵素活性を計算します。
アルカリプロテアーゼ活性の測定のための実験手順
酵素溶液の調製：1 g（±0.001）の乾燥酵素粉末を正確に計量し、10 mLの緩衝液（2.2.5）を加え、小さなビーカーに溶解し、ガラス棒でかき混ぜます。しばらく放置した後、上層液をメスフラスコに注意深く注ぎ、途中で底部に少量の緩衝液を加え、4回かき混ぜ溶解し、最後に100mLメスフラスコに移す。 。緩衝液でマークまで作り、よく振って、4層のガーゼでろ過します。ろ液5mLをとり、100mLメスフラスコに移し、蒸留水で標線まで希釈し、酵素液を2000倍に希釈する。
アルカリプロテアーゼ活性の定義
アルカリプロテアーゼ活性単位の定義：1グラムのアルカリプロテアーゼ粉末は、酵素活性単位と見なされるpH10および40°Cの条件下で1分あたり1マイクログラムのチロシンを生成できます。
アルカリプロテアーゼ活性測定の注意点
1.酵素反応の温度、pH、時間は、加水分解されるペプチド結合の数に直接影響するため、厳密に制御する必要があります。
2.トリクロロ酢酸で反応を停止した後、反応混合物を濾過して得られた濾液は透明でなければなりません。
3. Folin試薬は酸性環境に敏感で変化しやすいため、測定中の順番に規定があります。アルカリ環境を形成するために炭酸ナトリウム溶液を追加し、それを正常に機能させるためにフォリン試薬を追加する必要があります。
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